动物细胞融合的方法主要分为以下三类,可根据具体需求选择合适技术:
一、化学融合法
聚乙二醇(PEG)诱导融合 PEG是一种常用的化学融合剂,通过其吸水性和蛋白质凝聚作用,改变细胞膜表面电荷,促进细胞相互凝集和融合。操作时将细胞与PEG溶液混合,去除PEG后即可形成融合细胞。
其他化学方法
包括使用甲醛、二甲基亚砜(DMSO)等化学试剂破坏细胞膜完整性,但需后续修复膜结构,操作复杂且对细胞毒性较大。
二、物理融合法
电融合(电击法)
通过施加高压电脉冲,利用细胞膜表面电荷差异(如聚乙二醇处理后的负电荷)促进细胞融合。典型设备为高压电融合仪,可形成双核或多核细胞。
离心、震动等物理手段
极少数情况下,通过离心力或机械震动使细胞膜破裂,但效率较低且易引发细胞死亡。
三、病毒融合法
利用携带融合蛋白的病毒(如仙台病毒、副流感病毒)感染目标细胞,病毒融合蛋白直接介导细胞膜融合。操作时需先用紫外线灭活病毒,避免污染。
补充说明
细胞准备: 需根据细胞类型选择贴壁培养或悬浮培养,并通过选择性培养基筛选杂种细胞。 纯化与克隆
这些方法各有优缺点:PEG和病毒法操作相对简单,但需要严格的无菌条件;电融合效率较高,但可能对细胞形态造成破坏。