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动物细胞融合的方法?

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动物细胞融合的方法主要分为以下三类,可根据具体需求选择合适技术:

一、化学融合法

聚乙二醇(PEG)诱导融合

PEG是一种常用的化学融合剂,通过其吸水性和蛋白质凝聚作用,改变细胞膜表面电荷,促进细胞相互凝集和融合。操作时将细胞与PEG溶液混合,去除PEG后即可形成融合细胞。

其他化学方法

包括使用甲醛、二甲基亚砜(DMSO)等化学试剂破坏细胞膜完整性,但需后续修复膜结构,操作复杂且对细胞毒性较大。

二、物理融合法

电融合(电击法)

通过施加高压电脉冲,利用细胞膜表面电荷差异(如聚乙二醇处理后的负电荷)促进细胞融合。典型设备为高压电融合仪,可形成双核或多核细胞。

离心、震动等物理手段

极少数情况下,通过离心力或机械震动使细胞膜破裂,但效率较低且易引发细胞死亡。

三、病毒融合法

利用携带融合蛋白的病毒(如仙台病毒、副流感病毒)感染目标细胞,病毒融合蛋白直接介导细胞膜融合。操作时需先用紫外线灭活病毒,避免污染。

补充说明

细胞准备:

需根据细胞类型选择贴壁培养或悬浮培养,并通过选择性培养基筛选杂种细胞。

纯化与克隆:通过流式细胞术、细胞克隆技术(如传代培养)获得纯化的杂种细胞系。

这些方法各有优缺点:PEG和病毒法操作相对简单,但需要严格的无菌条件;电融合效率较高,但可能对细胞形态造成破坏。